BLACK SWEET: isolasi DNA

teringat suatu kisah yang engga akan gw lupakan.. semester 4 kemaren itu ada mata kuliah namanya BIOLOGI MOLEKULER.. dimana pengampunya ada ibu H sama ibu F.. beliau sang master-nya di bidang genetika.. biologi molekuler yang biasa kita sapa dengan BIOMOL, adalah anakan atau lanjutan dari mata kuliah genetika.. jujur, awalnya gw tertarik banget sama yang namanya GENETIKA, sampe2 gw jadi PJ matkul genetik waktu itu (ga ada hubungannya juga).. dari genetika banyak kejadian yang ngebuat diri gw menjadi orang yang ga sia sia dan lebih bertanggunng jawab..

bermula dari matakuliah genetika, ya walaupun gw suka banget sama matkulnya and dosen2nya, tapi gw juga masih engga paham kenapa nilai gw ga sejalan sama keinginan gw yang "ini"..
hmm dengan nilai genetika C di semester tiga, rasanya membuat dunia mau runtuh #lebay.. masa peLOBIan dengan dosen yang bersangkutan untuk terjun di dunia genetika awalnya sudah menjadi tantangan buat gw.. lajut dengan biomol, dan gw ditantang sama bu H buat memaksimalkan di matkul biomol, dengan catatan engga boleh nilai C lagi..haha..
alhasil dengan segala upaya, menurut HATI gw suka banget tapi otak gw kaga siap dengan biomol dkk.. dan di akhir gw mendapatkan nilai yang C untuk C-ANTIK :D
dan bu H dengan sangat berat hati menggelengkan kepala untuk gw terjun di bidang genetika.. karena klo misal gw tetep memaksakan ikut terjun di genetika, juga gimana, kejang-kejang yang ada otak gw nanti..hmm.. dengan segala kekecewaan yang melanda, yaaaaaasudahlah.. mesti banyak belajar lagi ^^
dan gw terus MOVE ON sampai detik ini.. akhirnya gw terdampar di dunia perHEWANan.. :)
itu membuat gw makin JAYA!! #senyumsinis (alay)

udeh ah curcolnya...
balik lagi ke ISOLASI DNA..
apaan si isolasi DNA?
kalo kata om Campbell (2002) nih isolasi DNA merupakan langkah mempelajari DNA, dimana salah satu prinsipnya dengan sentrifugasi..Sentrifugasi merupakan teknik untuk memisahkan campuran berdasarkan berat molekul komponennya.. Molekul yang mempunyai berat molekul besar akan berada di bagian bawah tabung dan molekul ringan akan berada pada bagian atas tabung (Mader 193).. Hasil sentrifugasi akan menunjukkan dua macam fraksi yang terpisah, yaitu supernatan pada bagian atas dan pelet pada bagian bawah (Campbell 2002)..
lanjut,,,,,,,

Isolasi DNA dengan teknik sentrifugasi akan mengendapkan DNA. Supaya hasil isolasi berupa DNA murni yang tidak tercampur dengan molekul-molekul lain maka dalam proses isolasinya dicampurkan berbagai macam larutan. Larutan A berfungsi sebagai resuspensi yaitu penggabunagn kembali pelet yang telah terbentuk dengan larutan yang dicampurkan. Selain itu larutan A juga berfungsi sebagai buffer dan pengkelat. Pemilihan buffer tersebut dilihat dari kemampuan buffer menghasilhkan arus listrik. Larutan B yang terdiri atas SDS dan NaOH berfungsi sebagai larutan pelisis. NaOH sendiri dapat mendenaturasi protein. Sedangkan larutan C befrungsi untuk merenarutasikan kembali. Etanol 70% yang digunakan dalam proses isolasi berfungsi untuk mengeluarkan endapan garam karena Na⁺bermuatan positif dan DNA bermuatan negatif. Larutan ddH₂O yang ditambahkan berfungsi agar endapan DNA yang dihasilkan didapat dengan konsentrasi yang cukup tinggi. Larutan di vortex untuk memudahkan bakteri tersuspensi. Bakteri yang telah diendapkan tersebut kana lisis dengan penambahan larutan buffer. Agar proses lisisnya bakteri sempurna maka larutan dibolak-balik secara halus. Bakteri yang telah lisis ini ditandai dengan munculnya lendir. Ciran DNA yang dihasilkan kemudina dipisahkan dari endapannya. Cairan ini ditambahkan RNase untuk melisiskan RNA supaya hasil yang diisolasi berupa DNA murni (Campbell 2002).

ini nih yang bikin galau sampe sekarang :p (lebay)

DNA yang telah diisolasi diuji kualitas dan kuantitasnya melalui elektroforesis dan spektrofotometer. Elektroforesis memisahkan DNA, RNA, dan protein berdasarkan bobot molekul dan muatanya dengan menggunakan media pemisah. DNA bermuatan negatif sehingga pada elektroforesis DNA akan bergerak dari kutub negatif ke kutub positif. Kecepatan pergerakan ini tergantung pada ukuran molekul DNA, kerapatan media gel yang dilalui DNA, serta arus listrik yang diberikan untuk bermigrasi molekul DNA. Sebelum proses elektroforesis suspensi DNA dicampur dengan peyangga muatan berwarna loading dye. Penambahan warna ini berfungsi untuk menambah densitas sehingga DNA bearada di bagian bawah sumur, selain itu pewarna ini digunakan untuk memudahkan meletakan contoh DNA ke dalam sumur dan bergerak ke arah anoda dengan laju yang dapat diperkirakan sehingga dapat digunakan sebagai tanda migrasi DNA.
DNA hasil elektroforesis yang terlihat di atas lampu UV dapat dilihat pergerakannya (Campbell 2002).

menantang, dan gw merasa tertantang >.<

oh DNA

Hasil elektroforesis DNA total menunjukkan adanya pita-pita DNA yang diisolasi dari bakteri Escherichia coli yang kemungkinan adalah DNA plasmid.. Hal ini dapat dilihat dari pergerakannya yang tinggi. Pergerakan DNA di agarose berhubungan dengan besar molekul. Sehingga pergerakan yang tinggi ini menunjukan ukuran DNA yang tidak terlalu besar. Plasmid merupakan DNA sirkuler yang ukurannya relatif kecil. Hal ini menunjukkan bahwa DNA total yang diisolasi mempunyai keutuhan yang tinggi. Akan tetapi pada beberapa kelompok pergerakan DNA tiadak dapat diamati. Kejadian ini dapat terjadi karena kesalahan teknis saat memasukan DNA ke dalam sumur gel agarose. Bisa jadi DNA yang dimasukan tidak masuk benar-benar ke dalam sumur gel sehingga saat elektroforesis DNA tidak bergerak. Selain itu kesalahan juga dapat terjadi karena DNA yang telah masuk ke dalam sumur tersedot kembali masuk ke dalam pipet mikro. Sehingga sumur tidak berisi DNA (Campbell 2002).

Kuantifikasi DNA total dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 260 nm menunjukkan bahwa rendemen isolasi DNA konsentrasinya berkisar antara 19610 ng/ µL dan 19800 ng/ µL tiap 1500 µL bahan biakan E. coli. Tingkat kemurnian DNA plasmid yang diisolasi dilihat dari nilai absorban pada panjang gelombang 260 nm dibadi nilai absorban pada panjang gelombang 280 nm. Kemurnian DNA plasmid kelompok 8 menunjukan hasil sebesar 1,115. Nilai ini belim termasuk nilai DNA murni karena isolasi DNA murni nilainya lebih besar atau sama dengan 1,8 (Campbell 2002).

ini hasil elektroforesis dibawah sinar uv

cantik ya ^^

udah cukup dengan si ISOLASI DNAnya.. sekarang gw mau pamer beberapa koleksi hewan yang buat praktikum ini:

ikan glodok

ni ikan lucu lho, bisa jalan :D

si kakinya itu sebenernya si sirip ikannya, tapi keren ya ada ikan yang bisa jalan di darat ^^

banyak terdapat di hutan mangrove :)

ini kepting bakau

beli di pasar kalo yang ini :D :D

pagi pagi buta gitu deh belinya (kalo ga salah inget)

yang ini lupa jenis kepiting apa, sumpah cantik banget ya..

yang ini capitnya warna ungu, serem deh kalo liat aslinya >.<

lanjut,,,,,,,,,,

cerita yang lain, dan sangat mengharukan buat gw khususnya, sama temen2 lain.. kenapa?? ya, ini nih foto2 yang mengingatkan gw akan praktikum biomol bagian ISOLASI DNA..

biasanya sebelum kita praktikum itu ada pretest, pretest itu kaya ujian singkat biar sebelum kita ngejalanin praktikum udah tau apa2 aja yang pengin kita kerjain pas praktikum.. nah lain halnya dengan praktikum pada umumnya.. pretest praktikum biomol ini wajib lulus pretest, and kalo engga lulus ya dengan sangat berat hati INHAL praktikum..

keadaan ini gw alami sendiri, sam beberapa temen angkatan gw.. ada P, L, TD, LL, sama gw sendiri.. hehe.. kalo inget waktu kemaren, rasanya seperti anak terbuang dari yang lain.. kita ber-lima merasa terasingkan.. dan menunggu kepastian dari para dosen, dan tersangka utamanya adalah bu H.. diamana beliau yang nyetusin ide gila itu..huhu.. sambil menunggu galau di teras lab, kita ber-lima pada geje bin laper.. untung ada yang bawa jajan danusan..hoho.. danusan PMB (kalo ga salah inget).

dengan satu jam galau.. akhirnya si bu H keluar dan memutuskan,,,,,,,,,,,,,,,,,, kita ber-5 tetap INHAL.. yeaaaah :p pulanglah kita noh.. besoknya kita ketemu sekrenya si ibu H, nah ibu F.. ngelobi sana sini.. akhirnya kita tetep bayar INHAL dengan harga yang udah ditentukan, engga dapat di ganggu gugat.. melanyanglah uang sekian rupiah dalam waktu 5 menit buat PRETEST yang ga lulus..hmm

hihi tapi asik lho... praktikumnya jadi spesial.. ga rebutan.. kita bisa nyobain satu satu alatnya.. jadi lebih paham.. engga kroyokan.. dengan harga yang maksimal, kita juga dapet servis yang maksimal juga ^^

ditambah asistenya mas A sama mba S baiiiiiiik banget..hihi jadi makin seru bin ajaib :)

kapan lagi kita kaya gini????

praktikum INHAL dengan segala ketentuan dan tentunya PENGALAMAN ini buat jadi koreksi kedepannya.. dan menjadi bahan pembelajaran, biar engga nyia2in waktu (luamaaa banget lho acara isolasi dna ini, sampe nginep2 jelas).. ditambah engga nyia2in uang..haha (uang jajan noh yang jadi kepotong)..hoho.. tapi semua ini ada hikmahnya ko, dengan gitu kan, jadi bisa ISOLASI DNA SENDIRI :)

ini nih beberapa jepretan nakal disambi sama praktikum :D :D